PCR實驗室建設所需資料
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1周前
4月26日，國家衛健委舉辦全國視（shì）頻（pín）會議，明確提出（chū）“所有縣區級以上疾控機構、二級以（yǐ）上綜合醫院要抓緊進行改（gǎi）造，在短時間內（nèi）形成核酸檢測能力”。
各地的公立機構檢測能（néng）力不能滿足需求隻是暫時的，獨立醫學實驗室在充實檢測力（lì）量（liàng）的同時（shí），發揮自己豐富的檢驗管理運營理（lǐ）念，以及區域化覆蓋的（de）經驗優勢（shì），融入到“國家隊”核酸檢測能力的建設中，順勢而為，乘勢而上。
隨著各（gè）地都在建立PCR實（shí）驗室，本文從硬件基（jī）礎的角（jiǎo）度，梳（shū）理了PCR實驗室（shì）建設的幾個關鍵點，獨立醫（yī）學實驗室可以運（yùn）用豐富的運營（yíng）經（jīng）驗，進行建設指導（dǎo）、人員梯隊建立、質控體係搭建、區域化服務支持等。
如何建設PCR實驗室
與（yǔ）PCR實驗室建設相關（guān）的指導文件主要有四份：
《醫療機構管理條例》
《醫療機構臨床（chuáng）實（shí）驗室管理辦法》
《臨床基因擴增檢驗實驗室管（guǎn）理暫行辦法》
《醫療機構臨床基因擴增實驗室管理辦（bàn）法》
要求臨床PCR實驗室（shì），不但在實驗室設置及儀器設備等硬件上要滿足開展臨床檢驗的條（tiáo）件，而且要求實驗室在日常工作要有文件化的工作程序。
下麵就在PCR實驗室建設過程中的幾個（gè）關鍵控製點進行闡述:
01
建立PCR實驗室質量管理體係
根據實驗室的具（jù）體情況編寫質量體（tǐ）係文件，《質量手冊（cè）》、《程（chéng）序文件》、《作業指導書》，並保證管理體（tǐ）係運行有效（xiào）。
管（guǎn）理體係的特點是應有（yǒu）明確的目的、規（guī）範的管（guǎn）理、有效的製約、高效（xiào）的機製、能自我發展的整體。
建立完善的SOP文件，對完成各項質量活動（dòng）的方法作出規定，每個SOP都應對（duì）一個（gè）或一組相互（hù）關係的活動進行描述。
每個SOP文件（jiàn）應說明該項質量各（gè）環節的輸入、轉（zhuǎn）換（huàn）和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以（yǐ）及它們與有關活動的接（jiē）口關係。
明確每個環節轉換過程中各項因素的要（yào）求，即由（yóu）誰做、做什麽、做到什麽程序（xù）、達到什麽要求，如何控製、形成什麽記錄和報告（gào），以及相應的審批手續（xù）。
規（guī）定在質量活動中需要注意的（de）例外（wài）或特殊情況的糾正措施。SOP應簡練、明確和易懂並且（qiě）工作（zuò）人員熟（shú）練掌握和嚴格（gé）遵守。
02
PCR實驗室的相關設（shè）置
要完成一組PCR實驗，通常需要經過試劑配製、樣品處理、核酸擴增和產物（wù）分析4個（gè）實驗過程。
這4個實驗過（guò）程（chéng）的實驗用房應相鄰布置（zhì），組成一個獨立的PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括（kuò）:試劑準備區（qū）、標本製備（bèi）區、擴增區、產物分析區、各區配套的（de）緩衝區及公共走廊。
PCR實驗（yàn）室整體平麵布局（jú）
某醫（yī）院PCR實驗室（shì）平麵布局如圖1所示，整個區域有一個公用走廊，每個獨立實驗區設有專（zhuān）門的緩衝區。通過壓差控製，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶（róng）膠的汙染，並且降低擴增產物對人員和環境的汙染。
圖表1、某醫院PCR實驗室平麵圖
試劑準（zhǔn）備區
該實驗區主要進行的操作（zuò）為貯存試劑的製備、試劑的分裝和主反應混合液的製備。
試劑和用於標本製作的材料應直接運送至（zhì）該區，不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內，並在本區內製備成所需的（de）貯存試劑。
試劑準備區配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計（jì）算冷負荷時，需（xū）要將它們計算在內。
房間的麵積宜控製在15m2~20m2。本區的壓力梯度要求為:相對正壓狀態，以防止外界含（hán）核酸氣（qì）溶膠的空（kōng）氣進入，造成汙染。
標本製備區
該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯（zhù）存及其加入至擴增反應管（guǎn）和測定RNA時cDNA的合成。
標本製備區配備有2~8°C冰（bīng）箱和-20°C冰箱，計算冷（lěng）負荷時，需要將它們計算在內。在標本製備區，還需要配備生物安全（quán）櫃（guì），用於進行提取核酸的操作。
為避免提取的核酸（suān）在櫃內反複循環，造成標本之間的（de）交叉汙染（rǎn），出現假陽（yáng）性結果，該區域（yù）配備的生（shēng）物安全櫃（guì）必須是B2型的。生物安全櫃工作區垂直氣流全部來自（zì）實（shí）驗室，排風經過（guò）高效過濾器（qì）(www.gdlingjie.net)過濾後直接排至室外，不允許回到安全櫃和（hé）實驗室中。
根據經驗，如果實驗室內配（pèi）備生物安全櫃，每配備一台，實驗室的麵積增加10m2;標本製備區的麵積宜在25m2~30m2之間。本區的壓力梯度要求為:相對於（yú）鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠（jiāo）汙染。
擴增室
該區域主要進行的操作為（wéi）DNA或cDNA擴增。此外，已製備的DNA模板和合成的（de）cDNA(來自樣本製備區)的加（jiā）入和主反應混合液（yè）(來自試劑貯存和（hé）製備區)製備成（chéng）反應混合液等也（yě）可在本區內進行。
在巢式PCR測定（dìng）中，通常在第一輪擴增後必須打開反應管，因此巢式擴（kuò）增有較高的汙（wū）染危險性，第二（èr）次加樣必須在本區內進行（háng）。
擴增室主（zhǔ）要配備PCR實驗室的核心（xīn）儀器PCR儀（yí），本文實例中使用了ABI7500和（hé）ABI9700兩種PCR儀。
在實（shí）驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專（zhuān）門的UPS電源，以保證其（qí）正常工作。該區麵積控製在15m2~20m2。
本區（qū）的壓力（lì）梯度要求為:相對於鄰近區域為負（fù）壓，以避免氣（qì）溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的汙染，應盡量減少在本區內的不必（bì）要的走動。個別操作如加樣等應在超淨台（tái）內進行。建議采用5~10Pa壓差，在控製上比較容易實（shí）現。
產物分析區
該區域主要進行的操作為擴（kuò）增（zēng）片段（duàn）的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區域可（kě）不設。
在室內（nèi）配備通風櫥，保證（zhèng）房間內的相對負壓，空氣從（cóng）室外流向室內。該區麵積控製在15m²~20m²。
本區是最主要的擴增產物汙染來（lái）源，因此對本區的壓力梯度（dù）的要求為:相對（duì）於鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本（běn）區擴散至其（qí）它區域（yù）。建議采用5~10Pa壓差，在控製上比較容易實現（xiàn）。
03
正負（fù）壓區域緩衝室（shì）的設（shè）置
根據壓力梯度的要求，試劑配製室和樣（yàng）品處理室為相對正壓，擴增室和產物分析室（shì）為相對（duì）負壓，要求正壓的區域和要求負壓的區域的緩衝室內的壓力設計大不相同。
正壓緩衝室符合一般正壓（yā）潔淨室（shì）的緩（huǎn）衝（chōng）原則，主要（yào）是防止（zhǐ）室外環境空氣中的氣溶膠進入室內。正壓緩衝室的布置如圖2所示。
圖表2、正壓緩衝室的（de）布置（zhì）圖
負壓緩衝（chōng）室則是要（yào）求緩衝室對核酸擴增室及產（chǎn）物分析區保持正壓，對緩衝室外也保持正壓(主要是滿足室內淨（jìng）化需（xū）要，如室內無潔淨要求，此處可以為0壓)。負壓緩衝室的布置如圖3所示。
圖表3、負壓緩衝室的布置圖
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